Loading...
Антинуклеар эсрэгбие илрүүлэх фермент холбоот эсрэгбиеийн урвалын цомгийн загварыг боловсруулсан судалгаа
Зохиогч
Д.Мөнхжаргал
Т.Өлзийхүү
Б.Урангоо
М.Ариунзаяа
С.Хашчулуун
Э.Хөлгөн
Э.Маргад-Эрдэнэ
Т.Хонгорзул
Он
2024 оны тавдугаар сарын 13
Төрөл
journal article
Journal
Эрүүл мэндийн шинжлэх ухаан
Volume
20
Issue
6
Start Page
18
End Page
21
ISSN
2959-6947
Хураангуй
Үндэслэл: ANA (Anti-Nuclear Antibody) нь өөрийн эсийн ДНХ, РНХ, гистон уураг зэрэгт чиглэсэн аутоиммун механизмаар үүсдэг аутоэсрэгбие юм. Ийлдсэнд агуулагдах ANA-г илрүүлэх нь аутоиммун эмгэгийн үед оношилгооны маркер болдог бөгөөд ФХЭБУ-ын in-house оношлуурын цомгийг боловсруулах нь эмнэлзүйн болон эдийн засгийн ач холбогдолтой. Зорилго: Ийлдсийн ANA илрүүлэх ФХЭБУ-ын in-house цомгийн загварыг боловсруулах зорилго дэвшүүлэв. Арга, аргачлал: HEp-2 гэх олон төрлийн антигенийг агуулсан хавдрын шугаман эсийг антиген болгон ашигласан бөгөөд эсэд суурилсан ба эсээс ялгасан уургийг ашиглах гэсэн хоёр төрлийн арга зүйгээр туршилт судалгааг хийв. Эсийг бүхлээр ашиглахдаа 1 үүрэнд 20,000 эс байхаар тооцож хийсэн бол эсээс ялгасан уургийг 1 үүрэнд 5 мкг/мл байхаар тооцож анхдагч ба хоёрдогч эсрэгбиеэр үйлчлэн OD (Optical Density) утгыг тодорхойлов. Анхдагч эсрэгбие болох оношлуураар ANA эерэг эсвэл сөрөг тодорхойлогдсон ийлдсийг УНТЭ-ийн хэрх үе судлал, үе сэргээх төвийг түшиглэн цуглуулж хяналт болгон ашиглав. Хоёр төрлийн арга зүйгээр боловсруулж буй ФХЭБУ-ын үр дүнд антигенийг урвалын самбарт бэхлэх, өвөрмөц бус холболтыг саатуулах, анхдагч ба хоёрдогч эсрэгбиеэр үйлчлэх концентраци, хугацаа зэрэг нөлөөлж байв. Эерэг болон сөрөг хяналтын OD утгын зөрүүг нэмэгдүүлж буй протоколыг боловсруулав. Үр дүн: Уураг ашигласан загварын үр дүнгийн эерэг болон сөрөг хяналтын утгын зөрүү ойрхон тодорхойлогдсон ба статистик ач холбогдол бүхий ялгаагүй (р>0.05) байв. HEp-2 эсийн уургийг ашигласан цомгийн эерэг хяналтын OD утга 3 ба 5 дахь туршилтад өндөр тодорхойлогдов. Эерэг болон сөрөг хяналтын OD утгын зөрүүг нэмэгдүүлж буй протоколын оновчтой нөхцөлийг боловсруулав. Үүнд: Урвалын хавтанд бэхлэгдэн ургасан эсийг 1:1 метанол-ацетон ашиглан өрөөний температурт 20 минут бэхжүүлнэ. Эсийн эндоген пероксидазыг 0.1%-ийн quenching буферээр хориглож, 10%-ийн тугалын ийлдсийн альбуминаар өвөрмөц бус холболтыг саатуулна. Анхдагч эсрэгбиеийг 1:300-аар 30 минут, хоёрдогч эсрэгбиеийг 1:20,000-аар 1 цаг үйлчилнэ. HEp-2 эсийг бүхлээр ашиглахад эерэг ба сөрөг хяналтын утгын зөрүү статистик ач холбогдол бүхий ялгаатай (p˂0.0001) байв. Дүгнэлт: HEp-2 эсийг бүхлээр нь ашиглан эсэд суурилсан арга зүйгээр ийлдсийн ANA-г илрүүлэх ФХЭБУ-ын in-house цомгийн технологийг боловсруулав.
Background: The production of ANA (Anti-Nuclear Antibody) occurs through an autoimmune mechanism that targets the DNA, RNA, and histone proteins of one’s own cells. The detection of ANA in serum is a diagnostic marker in autoimmune diseases, and the development of an in-house ELISA has clinical and economic value. Aim: To develop an in-house ELISA kit for serum ANA detection. Materials and Methods: The HEp-2 cell line, rich in diverse cellular antigens, served as the antigen source. Two methodologies were explored: utilizing whole cells and isolated cell-derived proteins. In the former, 20,000 cells per well were employed, while the latter utilized proteins isolated from cells at a concentration of 5μg/ml per well. Serum samples categorized as positive or negative for ANA were obtained as primary antibodies from the Center for Rheumatology of the First Central Hospital of Mongolia. The ELISA procedure involved measuring Optical Density (OD) values using primary and secondary antibodies. Results: The developed in-house ELISA kits using both methodologies were influenced by various factors including antigen binding, non-specific binding inhibition, and antibody exposure duration. A refined protocol was devised, augmenting the disparity in OD values between positive and negative controls. The difference between the positive and negative control values of the model using protein was close and there was no statistically significant difference (p>0.05). The difference in OD values between the positive and negative controls using HEp-2 cell protein increased in experiments 3 and 5. Optimal protocol conditions were developed that maximized the difference between the OD values of the positive and negative controls including fix the cells attached to the reaction plate with 1:1 methanol-acetone for 20 minutes at room temperature. Cell endogenous peroxidase was inhibited with 0.1% quenching buffer, and nonspecific binding was inhibited with 10% calf serum albumin. Primary antibody at 1:300 for 30 minutes and secondary antibody at 1:20,000 for 1 hour. There was a statistically significant difference (p˂0.0001) between the positive and negative control values using whole HEp-2 cells. Conclusion: We successfully developed an in-house ELISA kit technology for the detection of serum ANA by HEp-2 cell-based ELISA methodology.
Нэмэлт мэдээлэл
Бүрэн эх: https://journal.mnums.edu.mn/index.php/emsu/article/view/1081
Эшлэл
Д.Мөнхжаргал, Т.Өлзийхүү, Б.Урангоо, М.Ариунзаяа, С.Хашчулуун, С.Чимидцэрэн нар. Антинуклеар эсрэгбие илрүүлэх фермент холбоот эсрэгбиеийн урвалын цомгийн загварыг боловсруулсан судалгаа. Эрүүл мэндийн шинжлэх ухаан. 2024;20(6):18-21.