Loading...
OX40L-Fc гагнаас уургийн плазмидыг гарган авсан дүн
Зохиогч
С.Энхтуяа
Т.Өлзийхүү
Ү.Сувд-Эрдэнэ
Б.Өлзийсайхан
Б.Амарбаясгалант
Б.Галиндэв
Б.Ариунзаяа
М.Мишээлт
Т.Хонгорзул
С.Цогтсайхан
Он
2024 оны дөрөвдүгээр сарын 13
Төрөл
journal article
Journal
Эрүүл мэндийн шинжлэх ухаан
Volume
20
Issue
4
Start Page
16
End Page
20
ISSN
2959-6947
Хураангуй
Үндэслэл: Хавдрын эсрэг дархлаа эмчилгээний суурь судалгаа болон эмнэлзүйн туршилт судалгааны сүүлийн үеийн үр дүнгээс үзэхэд дархлаа эмчилгээ нь хавдрын боломжит эмчилгээ болохыг харуулж байна. Т эсийн OX-40 дохио дамжуулах замыг идэвхжүүлэх нь Т зохицуулагч эсийг дарангуйлж Т эффектор эсийг идэвхижүүлдэг. Хоёр үндсэн төрлийн OX40 агонистыг энэ зорилгоор ашигладаг. Үүнд anti-OX40 хүнийжүүлсэн эсрэгбие болон OX40L-Fc гагнаас уураг орно. OX40L-Fc гагнаас уураг нь анти-OX40 хүнийжүүлсэн эсрэгбиеийг бодвол эдийн засгийн хувьд хэмнэлттэй төдийгүй Монгол улсад үйлдвэрлэх боломжтой байгаа нь энэхүү судалгааны үндэслэл болж байна. Зорилго: OX40L-Fc гагнаас уургийн плазмидыг рекомбинант ДНХ технологийн аргаар гарган авах. Арга, аргачлал: Плазмидын загварчлалыг US20160024176A1 патент бүхий MEDI6383 OX40L-Fc гагнаас уургийн амин хүчлийн дарааллыг ашиглан SnapGene программ дээр загварчлалыг гаргав. Оруулга ДНХ дарааллуудыг ПГУ-ын аргаар олшруулан бэлтгэсэн. Векторын дарааллыг HindIII, XhoI рестрикцийн эсгэгээр зүсэн бэлтгэлээ. ПГУ бүтээгдэхүүнүүд болон зүсэгдсэн векторыг цэвэршүүлэн гарцыг дүгнэсэн. Бэлэн болсон дарааллуудыг Гибсон угсралтын аргаар угсарсан ба угсрагдсан плазмидыг ПГУ-ын аргаар болон рестрикцийн эсгэгээр зүсэн шалгасан. Үр дүн: Гибсон угсралтын аргаар плазмидыг загварчлалын дагуу угсрахад агар дээр нэг клон ургасан бөгөөд ургасан клоныг шалгахад IgG4Fc, Traf, OX40L гэх дарааллууд тус ПГУ аргаар олширсон. Рестрикцийн эсгэгээр зүсэн шалгахад амжилттай зүсэгдсэн. Дүгнэлт: Плазмидыг ПГУ аргаар болон рестрикцийн эсгээр зүсэн шалгахад плазмид угсрагдсан байна.
Background: Recent studies investigating the efÏcacy of immunotherapy against malignancies and the consequential importance of immune modulation have elucidated the promising potential of immunotherapeutic interventions in combatting cancer. Activation of the OX-40 pathway has been identified as a pivotal mechanism in augmenting T-cell effector functions. To this end, two primary classes of OX-40 agonists have been harnessed: anti-OX40 monoclonal antibodies and OX40L-Fc fusion proteins. Notably, OX40L-Fc fusion proteins offer distinct advantages over anti-OX40 monoclonal antibodies, particularly in terms of production simplicity, thus holding promise for potential implementation within the biomedical landscape of Mongolia. The impetus for this study is derived from these foundational insights. Aim: Assembling the OX40L-Fc fusion protein plasmid using recombinant DNA technology Materials and method: The design of the plasmid blueprint was conducted utilizing SnapGene software, adhering to the specifications outlined in US patent US20160024176A1 for MEDI6383 OX40L-Fc fusion protein. Synthesis of DNA sequences ensued in accordance with the Polymerase Chain Assembly (PCA) technique as per established protocols. Subsequently, ligation of vector sequences and synthesized inserts was performed employing HindIII and XhoI restriction enzymes. Following this, purification of the resultant plasmids and digested vectors was executed, with the integrity of the constructs being validated via agarose gel electrophoresis. Subsequent to assembly, Gibson assembly methodology facilitated seamless fusion, with confirmation of resulting plasmids accomplished through PCR amplification and restriction enzyme digestion. Results: The application of the Gibson assembly technique yielded the synthesis of a plasmid clone in accordance with the prescribed design parameters. Upon scrutiny, the cloned entity exhibited the integrated sequences of IgG4Fc, Traf, and OX40L, as intended. Subsequent validation via restriction enzyme analysis afÏrmed the successful integration of the targeted fragments into the construct. Conclusion: Upon validation through both Polymerase Chain Reaction (PCR) analysis and restriction enzyme digestion, the plasmid was confirmed to have been effectively assembled.
Нэмэлт мэдээлэл
Бүрэн эх: https://journal.mnums.edu.mn/index.php/emsu/article/view/168
Эшлэл
Т.Хүсэлт-Од, Г.Энхтүшиг, С.Энхтуяа, Т.Өлзийхүү, Ү.Сувд-Эрдэнэ, Б.Өлзийсайхан нар. OX40L-Fc гагнаас уургийн плазмидыг гарган авсан дүн. Эрүүл мэндийн шинжлэх ухаан. 2024;20(4):16-20.